自動型凱氏定氮儀測定蛋白質(zhì)含量的試驗全過程
蛋白質(zhì)是人體中一個重要的組成部分，對人體的監(jiān)健康有著重要的影響，同樣在其他生物跟動物之中也是如此，所以蛋白質(zhì)含量的測定是一個非常重要的課題，今天我們來說說用自動型凱氏定氮儀測定蛋白質(zhì)含量的試驗全過程。
1 預(yù)消化及溫度控制因素
1.1預(yù)消化
在消煮前,如能對樣品進行預(yù)消化,則消煮時間可縮短。所謂預(yù)消化,就是提前l(fā)d將樣品稱好,放人開氏管中,加上催化劑及消煮液,反應(yīng)12h,這樣可避免由于噴濺損失而給測定結(jié)果帶來的影響,這一點對含纖維素及脂肪高的樣品尤為重要,這類樣品的消煮液也要酌情多加。
1.2溫度的有效控制
在剛開始消煮時,一定要低溫,并在剛有發(fā)泡沸騰時就將開氏管從電爐上取下,讓其沸騰停止后再放上電爐,這樣不易因沸騰劇烈而導(dǎo)致開氏管壁粘上樣品,待高溫時形成炭粒而無法進人開氏管瓶底部消煮,使蛋白質(zhì)損失。在消煮中,當(dāng)開氏管內(nèi)的樣品由黑色變?yōu)楹稚珪r應(yīng)將爐溫調(diào)低,或者將開氏管移到電爐子的邊緣,以防因爐溫太高而使小漏斗被氣體頂?shù)?此點尤其在消煮土壤樣品時更應(yīng)注意。
2 蒸餾中堿液皿的適度控制
在蒸餾時應(yīng)根據(jù)加人消煮酸的多少來確定加人NaoH溶液量。堿液加少了,氮素沒有全部從消煮液中轉(zhuǎn)化出來,造成測定結(jié)果偏低;而堿液加人太多,又造成浪費。通過多年測試分析,我們認為加堿量是加酸量的5一6倍,堿的濃度為40%(WlW)。加堿量適中,在開始蒸餾后,消煮液呈黃褐色,但這個范圍很窄。在加人堿量不足時,溶液呈白藍色,太多時又呈藍色。
3 硫酸滴定液的濃度與樣品含氮且的關(guān)系
選用H2sO4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定蒸餾液時,其濃度的大小,取決于樣品含氮量的高低。兩者最終以適度的滴定體積來決定。適度的耗酸量控制在5.00耐左右,滴定體積太小,則誤差幾率增大,滴定體積太大,又浪費時間,降低工作效率,尤其是在大批量測定時更為突出。
4 體系的空白
每批次測定時都應(yīng)有空白樣,用空白樣的消耗量來監(jiān)測批次間的情況,一般空白消耗量在0.30時左右。如果硼酸接收液增加,則空白值也會有一些升高。如果空白值太高、太低,都要查找原因,否則會造成蛋白質(zhì)測定結(jié)果的正負誤差。
